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广州竞远生物科技有限公司 
| 联系人：向远 先生 (市场经理) |
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手 机：18028560893  |
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| 分子水平实验（2） |
病毒包装
1.慢病毒包装
服务简介
慢病毒( Lentiviruses)属于逆转录病毒科。慢病毒( Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、 MICRORNA研究以及活体动物实验中。我公司提供慢病毒载体构建、RNAi( SHRNA)、 MIRNA、过表达和干抗慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。灵敏度更高。
整体实验流程
1.构建质粒
a.慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩増引物，同时引入酶切位点，采用PCR技术(采用高保真KOD酶，3K内突变率为09％)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区( coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
b.慢病毒干扰质粒载体的构建合成 SIRNA对应的DNA须环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。
c. MIRNA载体构建从 genomic中调取基因相应的Mir前体，并在调取引物中引入酶切位点。2.共转293T细胞
3.收集病毒
4.病毒转化、浓缩
5.病毒感染活性鉴定
6.成果交付
质量控制
我们会对每一批病毒都进行滴度检测，严格控制质量，让你百分百放心。针对用携带荧光报告基因的转移质粒生产的病毒，我们会先用荧光法检测病毒的转导率，如能达到使用要求，再进一步采用qPCR法检测病毒滴度。
2.腺病毒包装
实验原理
腺病毒( Adenovirus)是一种没有包膜的直径为70-90nm的病毒颗粒，为线状双链DNA分子，约含35000bp，两端各有长约100bp的反向重复序列
腺病毒为5型血清型腺病毒，缺失了腺病毒的早期表达基因序列E1区和E3区。E1是腺病毒复制所必须的，E1的缺失使其不能自身复制，只能依靠包装细胞如HEK293细胞提供的反式互补进行复制扩增，以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统，E3区的去除能减少宿主的体内免疫反应。
腺病毒包装采用的是*新的 Admax:系统，通过Cre-loxp重组酶，使共转染到HEK293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和骨架质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒，获得的病毒滴度更高，其病毒滴度可以达到1×10^12 pfu/ml
腺病毒载体有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多种启动子可供选择;而且还有EGFP、 ZSGRE、Tomato、 mcherry、EYF等多种荧光标记蛋白可供选择。
3.腺病毒相关病毒包装
实验原理
腺相关病毒( adeno- associated virus，AAV)，也称腺伴随病毒，属于微小病毒科依赖病毒 |
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