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广州竞远生物科技有限公司 
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| 细胞水平实验（2） |
Annexin V/PII双染法
细胞凋亡研究不仅受到基础医学界的重视，也日益受到临床医学领域的青睐。通过检测药物、基因或蛋白对细胞凋亡及凋亡调控基因的影响，在肿瘤防治、老年痴呆、艾滋病、自身免疫病，心肌梗塞等研究上都发挥着积极的作用。
3、流式鉴定细胞表面抗体
实验原理
基本原理就是用荧光标记的单克隆抗体来识别细胞表面的抗原(也就是所谓的表面标记)，然后通过流式细胞仪来检验表面抗原的多少和种类(也就是荧光强度，代表了抗体结合的种类和数量)来鉴定细胞是哪类
应用
细胞鉴定分类等，检测阳性表达细胞的比例。
实验流程
1、制备样品的单细胞悬液
2、标记流式抗体
3、流式上机检测。
4、活性氧(ROS)检测
实验原理
活性氧检测( Reactive Oxygen Species Assay Kit是一种基于荧光染料 DCFH-DA(2，7- Dichlorodi- hydrofluoresceindiacetate)的芡光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的*常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞內。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有芡光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在*大激发波长480nm，*大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。 Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其芡光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
检测
原位裝载探针法:激光共聚焦显徴镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。收集细胞后装载探针:用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。
4、线粒体膜电位检测
实验原理
JC-1是一种碳氰化合物类阳离子芡光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光;当丁C-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的芡光，激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这特征就可以检测线粒体膜电位的变化。
实验流程
1.细胞培养;
2.用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组，收集细胞;
3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10的细胞;
4.取100pL10× Incubation Buffer/加900L灭菌去离子水稀释成1 |
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