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广州竞远生物科技有限公司 
| 联系人：向远 先生 (市场经理) |
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| 电 话：020-84131654 |
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手 机：18028560893  |
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| 分子水平实验（3） |
双荧光素酶报告基因检测
实验原理
通过将感兴趣的目的基因转录调控元件构建到带荧光素酶( firefly luciferase)的表达载体，如pGL3，构建成报告基因质粒，使这段DNA序列调控 luciferase的转录。然后将报告基因质粒转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，并加入底物荧光素后(luciferin)， luciferase可以催化荧光素发出荧光，从而可以通过测量荧光值的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。为避免由于质粒转染细胞时效率的差异带来的误差，可以同时转入 Renilla?芡光酶素的报告基因质粒作为内参，即双荧光报告系统。该实验可以用于研究转录因子对promoter或 enhancer序列的调控，也可以用于研究受体活性，细胞内信号通路，或者 MICRORNA对基因表达的调控。
应用
1.澘在启动子/启动子核心区域检测
2.澘在增强子/抑制子等调控子核心元件检测
3.启动子区可能的转录因子结合位点检测
4.启动子/增强子与转录因子的相互作用;
5.病毒/细胞相互作用;
6.药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强);
7.射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或増强)
8. MICRORNA靶基因验证。
染色质免疫共沉淀相关服务
实验原理
染色质免疫共沉淀( Chromatin Immunoprecipitation，ChIP技术主要是用于研究DNA和蛋白质的相互作用。染色质主要是由组蛋白和缠绕在上面的DNA组成。在染色质上还结合了许多转录因子、染色质重塑相关蛋白和非编码RNA。染色质上结合的蛋白或者组蛋白上不同的共价修饰可以通过改变染色质的结构，或者招募相关的因子来调控基因的表达。通过ChIP技术，我们可以研究不同的组蛋白修饰、转录因子以及染色质上结合的一些其他蛋白，在基因组上的分布。
ChIP实验的主要原理是，当DNA和蛋白结合或者距离很近时，通过甲醛固定交联，在DNA和蛋白分子之间形成共价键。将染色质通过超声波破碎或者徴球菌核酸酶处理，打断成小片段，然后通过特异性的ChIP级别抗体，富集目的蛋白。经过逆交联处理之后，消化水解目的蛋白，回收得到目的DNA，从而得到与目的蛋白相互作用的DNA信息。
整体实验流程
1.细胞交联
2.抗体有效性检测
3.免疫共沉淀
4.建库测序/PCR验证
样本要求
动物细胞:3x107～5x107，1％的甲醛交联，干冰运输。
动物组织:0.5-2g，对于较大的组织，先切成1-5mm的组织块，干冰运输。
植物组织:5-20g，干冰运输。
抗体需要提前验证满足ChIP或者IP实验要求。
生物信息分析内容
标准信息分析
1.去接头污染，去低质量 reads和测序质量评估
2.ChIP测序序列与参考基因组序列的比对
3.C |
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